PM2.5 標準品 SRM1649b實驗分析方法

PM2.5 標準品 SRM1649b相關實驗分析方法:

1.多環芳烴化合物對表皮真皮細胞毒性效應分析:永生化的皮膚角質形成細胞 HaCaT 細胞和皮膚成纖維細胞,NHDF 細胞為研究對象，以國際準品空氣顆粒性污染物多環芳烴化合物 SRM1649b 潯出液為刺激物。研究不同時間條件下(0 小時、6小 時、12小時、24小時，36 小時，小時)不同濃度 SRM1649b 對 HacaT 細胞和 NHDF 細胞增殖活性的影響。傳代 HacaT 細胞和 NHDF 細胞，顯微鏡下觀察有 70-80%的紐融合時用于實驗，吸去原培養液，加入專用培養基，稀釋 SRM1649b，使其終濃度為(0、50、100、200、400ug/mL)，在不同濃度，不同時條件下避光孵育，用 CCK8 法檢測不同時間點和濃度孵育 SRM1649b 對 HaCaT 細胞和 NHDF 細胞增殖活性的影響; 從而探索出不同濃度不同時間點 SRM1649b 浸出液對 HaCaT 及 NHDF 細胞生存率 的影響并選擇適宜的實驗濃度。

2.采用流式細胞術檢測PM2.5 標準品 SRM1649b 對 HaCaT 和 NHDF 的細胞周期，及凋亡的影響。 采用細胞免疫熒光法觀塞 空氣顆粒性污染物多環芳烴合物 SRM1649b 浸出液刺激前后 HaCaT 和 NHDF 細胞內芳香族化 合物受體 AhR 的分布變化;

3.用實時熒光定量 PCR 方法檢測各濃度實驗組 HacaT 和 NHDF 細胞中基質金屬 蛋白酶 MMP1，MMP3，MMP9 的 mRNA 表達情況。用Western-blot 方法檢測各濃度實驗 組 HaCaT 和 NHDF 細胞中基質金屬蛋白酶 MMP1 蛋白表達情況。用 ELISA 法檢測基質 金屬蛋白酶

MMP1 蛋自的細胞外分泌情況:

4.實時熒光定量 PCR 和 Western-blot 方法檢測 PAHS(SRM1649b 浸出液)與受 體(AhR)結合后引起的胞漿及核內下游靶基因的變化括 ERK1/2, c-Jun 等調控 分子的磷酸化水平，以及 CYP1A1 等下游靶基因的 mRNA 表達水平:5.空氣顆粒性污染物多環芳烴化合物 SRM1649b分析加入 AhR 受體拮抗劑后對 HaCaT 和 NHDF中 MMP1，CYP1A1 等表 達的影響。

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